近期，新冠病毒感染的肺炎疫情牽動(dòng)著全國(guó)人民的心。當(dāng)前，打贏疫情防控阻擊戰(zhàn)進(jìn)入關(guān)鍵時(shí)期，快速完成疑似病例確診，成為最為關(guān)鍵的工作之一。

要快速精確地完成確診工作，檢測(cè)設(shè)備和儀器成為重要的前提。那么，新冠病毒是如何確診的？檢測(cè)設(shè)備是如何做到精確測(cè)量的？設(shè)備不準(zhǔn)確會(huì)造成什么后果？近日，圍繞這些問(wèn)題，記者采訪了南京市計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)南京市計(jì)量院）總工程師胡寧、醫(yī)療器械部副部長(zhǎng)陳鴻飛。

確診病毒這兩種設(shè)備必不可少

據(jù)胡寧介紹，要檢測(cè)出新冠病毒，首先需要病毒核酸檢測(cè)試劑盒。由于核酸檢測(cè)試劑盒需要針對(duì)特定的病毒進(jìn)行單獨(dú)研發(fā)生產(chǎn)，這就造成了在疫情前期確診病例較少、而后期確診病例直線上升。同時(shí)，要做到最終檢測(cè)確診病毒，就需要使用到實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，該設(shè)備能否檢測(cè)確診病毒的關(guān)鍵，其工作狀態(tài)如何，將直接影響病毒檢測(cè)的效率和精準(zhǔn)度。

記者了解到，熒光定量PCR儀作為確診新冠病毒的定量分析儀器，對(duì)新冠病毒的檢測(cè)確認(rèn)至關(guān)重要，且病毒檢測(cè)對(duì)設(shè)備精度要求比較高。同時(shí)，由于熒光定量PCR儀設(shè)備價(jià)值較高（最便宜的熒光定量PCR儀約30萬(wàn)元，最高級(jí)的將近100萬(wàn)元），一般只有省市一級(jí)疾控中心、大中城市的三級(jí)醫(yī)院等機(jī)構(gòu)才擁有，且檢測(cè)工作必須是國(guó)家相關(guān)部門(mén)指定的較高級(jí)別的、具有資質(zhì)的生物安全實(shí)驗(yàn)室得到的數(shù)據(jù)才能被認(rèn)可，這也從一個(gè)方面導(dǎo)致了前期病例確診較慢。

計(jì)量人員對(duì)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢定校準(zhǔn)

那么，熒光定量PCR儀在病毒的快速確診方面能起多大作用呢？據(jù)陳鴻飛介紹，根據(jù)國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布的《新冠肺炎診療方案（試行第四版）含最新中醫(yī)診療方案》，實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)被列為確診病例的兩種方法之一，而且憑借時(shí)間短、成本低等特點(diǎn)，已成為應(yīng)用最廣的確診新冠病毒的方法。

儀器不準(zhǔn)會(huì)直接導(dǎo)致病毒誤測(cè)

針對(duì)熒光定量PCR儀進(jìn)行病毒檢測(cè)的流程問(wèn)題，陳鴻飛介紹說(shuō)，首先，由實(shí)驗(yàn)室在病人呼吸道樣本或血液樣本中分離出的病毒進(jìn)行處理，提取出病毒核酸這一特定的“身份證”（病毒基因序列）。其次，將病毒核酸與試劑盒內(nèi)各組分混合形成完整的RT-PCR反應(yīng)體系，放入熒光定量PCR儀后，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，根據(jù)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)的熒光曲線來(lái)判定是否為新冠病毒。

按照陳鴻飛的介紹，在具體操作中，檢測(cè)人員會(huì)將提取病人的核酸樣本和試劑盒配比好之后，放到熒光定量PCR儀中進(jìn)行PCR反應(yīng)，通過(guò)溫度的升降，病人樣本中的新冠病毒核酸會(huì)被特異性的引物探針識(shí)別，從而進(jìn)行快速?gòu)?fù)制，導(dǎo)致其熒光信號(hào)倍增，儀器會(huì)檢測(cè)到相應(yīng)呈倍數(shù)擴(kuò)增的曲線，并以此來(lái)最終確診病人樣本中是否含有新冠病毒。也就是說(shuō)，熒光定量PCR儀更像是一間“房屋”——一間為病毒和試劑盒中試劑提供反應(yīng)體系、可以進(jìn)行詳細(xì)觀察的“透明屋”。

“熒光定量PCR儀檢測(cè)中的誤差隨時(shí)都會(huì)導(dǎo)致誤診情況的出現(xiàn)，必須要確保其檢測(cè)的可靠性?！标慀欙w說(shuō)：“比如在溫度控制的時(shí)候，按照標(biāo)準(zhǔn)要求溫度準(zhǔn)確度誤差要求在±0.5℃之內(nèi)，溫度均勻性誤差不大于1.0℃。如果溫度誤差過(guò)大，比如超過(guò)1.0℃甚至更大的話，會(huì)造成本來(lái)應(yīng)該進(jìn)行的PCR擴(kuò)增反應(yīng)無(wú)法正常進(jìn)行或是擴(kuò)增效率降低，此時(shí)應(yīng)該顯示陽(yáng)性的樣本熒光曲線會(huì)呈現(xiàn)出假陰性，直接導(dǎo)致對(duì)病毒的誤測(cè)，造成嚴(yán)重的后果。熒光檢測(cè)模塊如果有問(wèn)題，會(huì)導(dǎo)致儀器無(wú)法檢測(cè)到正確的熒光信號(hào)，也同樣會(huì)導(dǎo)致儀器得到病人樣本錯(cuò)誤結(jié)果?！?/span>

計(jì)量工作提供重要技術(shù)支撐

熒光定量PCR儀在病毒檢測(cè)確診中扮演了如此重要的作用，其自身的精準(zhǔn)可靠便顯得愈加重要。而要實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo)，計(jì)量工作在其中起到了重要的技術(shù)支撐作用。

此次新冠肺炎疫情發(fā)生后，南京市疾控中心緊急報(bào)檢，請(qǐng)求南京市計(jì)量院對(duì)該中心的4臺(tái)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢定校準(zhǔn)。

胡寧告訴記者，由于使用該儀器的都是處在防疫一線的部門(mén)，所以在檢定工作中一定要確保人員的絕對(duì)安全和儀器的準(zhǔn)確可靠。接到報(bào)檢請(qǐng)求后，南京市計(jì)量院圍繞南京市疾控中心快速檢定、精準(zhǔn)檢定的實(shí)際需要，優(yōu)化流程，快速響應(yīng)，派出精兵強(qiáng)將，在最短的時(shí)限內(nèi)完成了檢定工作。

記者了解到，熒光定量PCR儀檢定校準(zhǔn)過(guò)程有一套嚴(yán)格規(guī)范的流程要求，需要按照國(guó)家主管部門(mén)出臺(tái)的JJF1527-2015《聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》計(jì)量技術(shù)規(guī)范進(jìn)行校準(zhǔn)。

據(jù)陳鴻飛介紹，熒光定量PCR儀檢定主要分兩個(gè)部分，一個(gè)是溫度檢測(cè)，另一個(gè)是熒光檢測(cè)，其檢測(cè)都需要專(zhuān)門(mén)的設(shè)備。在溫度檢測(cè)時(shí)，計(jì)量人員使用高精度的熒光定量PCR儀專(zhuān)用溫度檢測(cè)設(shè)備，該設(shè)備包含15個(gè)溫度檢測(cè)探頭，能完全貼合儀器的加熱模塊，按照誤差標(biāo)準(zhǔn)，溫度檢測(cè)的不確定度要小于0.1℃。同時(shí)，熒光檢測(cè)時(shí)需要使用國(guó)家核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)覆蓋了（102～108）拷貝數(shù)的核酸樣本，可以全面評(píng)價(jià)熒光定量PCR儀熒光檢測(cè)性能。

“按照規(guī)范要求，目前全國(guó)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)建標(biāo)、能夠完成熒光定量PCR儀校準(zhǔn)的計(jì)量機(jī)構(gòu)不超過(guò)10家?！睋?jù)胡寧介紹，南京市計(jì)量院擁有批準(zhǔn)建設(shè)的唯一國(guó)家級(jí)生物技術(shù)藥物產(chǎn)業(yè)計(jì)量測(cè)試中心，且該院和計(jì)量“國(guó)家隊(duì)”——中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院一直保持密切的合作，在該領(lǐng)域具備較強(qiáng)的科研和技術(shù)能力，能夠嚴(yán)格按照規(guī)范要求完成校準(zhǔn)工作。

此次檢定校準(zhǔn)工作由陳鴻飛和一名同事共同完成。陳鴻飛說(shuō)，一臺(tái)熒光定量PCR儀熒光部分檢測(cè)需要一個(gè)半小時(shí)左右，溫度部分檢測(cè)需要半個(gè)小時(shí)左右。檢定中，他和同事對(duì)南京市疾控中心的熒光定量PCR儀溫度參數(shù)進(jìn)行了修正，對(duì)熒光部分的核酸樣本偏差、樣本線性等參數(shù)給出了綜合評(píng)價(jià)，并出具了校準(zhǔn)證書(shū)，校準(zhǔn)工作得到了南京市疾控中心的高度肯定和認(rèn)可。

“計(jì)量部門(mén)的工作，就是要通過(guò)高效快速優(yōu)質(zhì)的檢定校準(zhǔn)，讓儀器更加準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)更加可靠、質(zhì)量控制更好、更加快速地實(shí)現(xiàn)新冠病毒的檢測(cè)確認(rèn)，為打贏疫情防控阻擊戰(zhàn)作出計(jì)量人的貢獻(xiàn)?！焙鷮幷f(shuō)。